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香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T—DNA插入突变体的筛选_论文

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南方农 业学报 J O U R NA L   O F   S O U T HE R N   A GR I C U L T U R E   I S S N  2 0 9 5 —1   1 91 ;CODE N  NNXAAB   D O I : 1 0 . 3 9 6 9 / j : i s s n . 2 0 9 5 - 1   1 9 1 . 2 0 1 3 . 1 2 . 1 9 8 5   香蕉枯萎病菌4 号生理  小种农杆菌介导遗传转化  体 系的建立及T — D   N A 插入突变体的筛选  毛 超 ,戴 青冬  , 一 ,汪  军   ,刘一 贤   ,杨腊英z ,郭立佳z ,黄俊 生:   (   海南大学 农学院,海口 5 7 0 2 2 8 ;   中国热带农业科学院 环境与植物保护研究所 , 农业部热带农林有害生物入侵监测与控制   重点 实 验室,海南省热带农业有害生物检测与控制重点实验室,海口 5 7 1 1 0 1 )   摘要: 【 目的 】 通过农杆菌介 导的遗传转 化( A T MT ) 方法 , 建立 香蕉枯萎病4 号生理 小种 的高效转 化体系 , 构建病  原菌 的突变体库并进行筛选 , 为 已突变基 因提供分子标记 , 在分子水平上 对香蕉枯萎病菌 的功能基 因进行深入研究 。   【 方法 】 通过单 因子变量 ( 试验材料 、 真菌孢子 浓度 、 农杆菌预诱导终浓度 、 I M 诱导培养基p H、 共培养介质 、 共培养时A s   浓度 、 共培养温度 ) 试验 , 研究影 响农 杆菌介导 的遗传转化效率 的关 键因素 , 并通过形态观察 与致病性试验筛选 突变  体 。【 结果 】 得到 的最佳转化条件 为 : 农杆菌预诱导浓度O D 6 o o = O _ 8 , 病原菌孢 子浓度1 0   C F U / m L , 转 化受 体材料为分生  孢子 , 共培养培养基p H  5 . 4 , 共培养温度2 5℃, 共 培养 培养基 中As 浓度2 0 0   i x mo V L, 共培养介质为硝酸纤维素膜 。 通过  条件优化 , 转化效率可达到8 0 0 ~ 9 0 0 个转化子/ 1 0 6  ̄孢子 。【 结论 】 通过农杆菌介导 的遗传转化成 功将 G   基 因转入病  原菌 中并表达 , 构建了病原菌的T . D NA插入突变体库 , 并通过筛选得到多个表型和致病性发生变化 的突变体 , 为香蕉  枯萎病菌基 因组 功能 注释 的研究奠定 了基础 。   关键词 : 香蕉枯萎病菌 4 号生理小种 ;B : 菌株 ;农杆菌转化 ;G F P l 基因  中 图分 类 号 : ¥ 4 3 2 . 1   文献标志码 : A   文 章编 号 : 2 0 9 5 — 1 1 9 1 ( 2 0 1 3 ) 1 2 — 1 9 8 5 — 0 7   Es t a bl i s hm e nt   o f   ATM T  Fu s a r i u m  o x y s po r u m  Ls p. c u be ns e   r a c e   4   e f f e c t i v e   t r a ns f o r ma t i o n   s y s t e m  a nd   s c r e e ni ng   o f   t he   T-DNA  i ns e r t i o n a l   m ut a nt s   MA O   C h a o  , D A I   Q i n g — d o n g   一 , WA N G   J u n   , L I U   Y i — x i a n   , Y A N G   L a — y i n g   ,   G U O   L i - j i a 2 , H U A N G   J u n - s h e n g   (   C o l l e g e   o f Ag r o n o my , Ha i n a nUn i v e r s i t y ,Ha i k o u   5 7 0 2 2 8 , Ch i n a ;  En v i r o n me n t a n dP l a n t P r o t e c t i o nI n s t i t u t e , C h i n e s e   Ac a d e my   o f   T r o p i c a l   Ag r i c u h u r a l   S c i e n c e / Ke y   L a b o r a t o r y   o f   Mo n i t o in r g   a n d   Co n t r o l   o f   T r o p i c a l   Ag r i c u l t u r e   a n d   F o r e s t   I n v a s i v e   Al i e n   P e s t s ,Mi n i s t y  r o f Ag r i c u l t u r e / Ha i n a n   K e y   L a b o r a t o r y   f o r   Mo n i t o i r n g   a n d   Co n t r o l   o f   T r o p i c a l   Ag r i c u h u r a l   P e s t s . Ha i k o u  5 7 1   1 0 1 .C h i n a )   Ab s t r a c t : 【 O b j e c t i v e 】 B a s e d   o n   a g r o b a c t e r i u m- me d i a t e d   t r a n s f o r ma t i o n ( A T MT



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